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质粒DNA纯化常见问题解答

Q:产量低

A:

• 检查细胞生长情况,培养条件是否适合质粒增殖。尽可能选择高拷贝数的质粒。

• 如果质粒拷贝数低,可适当增加收集的菌液量,但是要保证菌体可以被完全裂解。

• 如果裂解液过于粘稠,应适当减少菌体量。

• 培养时间过长或在 2-8℃保存时间过长会明显降低产量,建议使用新鲜的菌液。


Q:质粒 DNA 中有基因组 DNA 污染

A:裂解时间不宜超过 5 分钟。


Q:影响下游酶切

A:洗涤液 WB 洗涤后应尽量离心去除残留的液体,待硅胶膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液。

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