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基因组DNA纯化常见问题解答

Q:DNA 产量低

A:

• 裂解不充分:减少起始材料的用量。检查样品中是否加入了 Proteinase K溶液。如果提取的材料为动物组织,尽量将组织切碎,并要保证材料完全浸泡在裂解液中。适当延长裂解时间。

• 提取材料质量不好:尽量选用新鲜材料,样品采集后应尽快保存在 -70℃或液氮中。DNA 的产量取决于材料的种类和幼嫩程度。

• 离心柱堵塞:过柱前检查裂解液是否清亮,去除溶液中过于粘稠的不溶物。

• 洗涤溶液中未添加无水乙醇。必须在洗涤溶液中添加合适比例的无水乙醇。

• 洗脱条件不合适:洗脱液 EB 或超纯水最好预先加热至 70℃,用超纯水洗脱前应检查其pH 值是否在 7.0-8.5 之间,如 pH 值小于 7 将明显影响洗脱效率,需调节后再进行洗脱。洗脱液应尽量加到离心柱的中央,在离心前室温静置 1 分钟。

• DNA 断裂或降解:避免因移液枪反复吹吸或反复冻融样品造成的 DNA 损伤。避免在操作过程中带入外源 DNase 污染。


Q:洗脱液颜色发黑或硅胶膜脱色 ( 动物组织或鼠尾材料 )

A:来源于组织的色素大量结合在离心柱上并与 DNA 一并洗脱:在过柱前检查是否已加入乙醇,乙醇可防止色素与硅胶膜结合。在裂解液结合步骤可适当加大转速和延长离心时间。

• RNA 污染:可在样品材料制备过程中添加适量的 RNase A 降解 RNA。


Q:影响下游的酶切

A:

• 纯化的 DNA 中有乙醇残留:在洗涤步骤中可能会带来乙醇的残留。加入洗脱液之前将离心柱在最大转速下离心 2-3 分钟彻底干燥离心柱。

• 纯化的 DNA 中有盐分残留:采用正确的洗涤操作步骤,用不同 CB 溶液洗涤后再用 WB 洗涤。

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