荧光标记抗体系列


流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)是根据单个细胞不同形态、表面标志物、内容物的差异,利用流式细胞仪检测细胞固有的或特异性标记的信号,从而实现细胞分析与细胞分选目的的一种方法。经过近五十年的发展和完善,流式细胞术技术已经十分成熟,并被广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面,涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域,在各学科中发挥着重要的作用。

随着流式细胞术应用领域的日益广泛,荧光标记产品的种类、数量也在不断增多,加上多色分析实验方案需求的增长,荧光标记抗体如何选择,也成为了流式技术是否能被成功应用的关键因素之一。


 荧光标记抗体

抗体是机体组织在感受到特定外来物质时由浆细胞(效应B细胞)分泌、被免疫系统用来鉴别及中和外来物质如细菌、病毒等的蛋白质。而荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合,形成荧光素-蛋白质结合物(即荧光标记抗体),此结合物仍保留着抗体活性,同时具有荧光素的示踪作用。


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注:图片来源于网络


 抗体荧光标记的选择

1. 如果实验中检测单一指标:

不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以FACS Calibur仪器为例:PE>APC>PE-Cy5>PerCP-Cy5.5>FITC>PerCP,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原。使用时需根据检测的目标蛋白进行具体选择。

 

2. 如果同时检测多个指标:

确认流式细胞仪能检测多少个通道:流式抗体每个通道只能选择一种荧光素,且各个通道之间的荧光素可以随意搭配。

 

3. 常用荧光标记:

FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5等。


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 抗体荧光标记的方式

抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中,尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。


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 荧光标记抗体的应用

荧光标记抗体目前主要应用于癌症,免疫学,心血管,外泌体,神经科学,发育生物学,MSC,细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖/活力研究,细胞信号转导,新陈代谢,临床诊断等领域的研究,典型应用为MSC鉴定和免疫学流式分析等。

1. MSC表面标志物:

国际细胞治疗学会 (ISCT) 认定,MSC细胞表达CD73、CD90 与 CD105,不表达CD11b、CD14、CD19、CD34、CD45、CD79a与HLA-DR,其中CD73、CD90 、CD105、CD45为MSC必检标志物。

2. T淋巴细胞表面标志物:

CD3、CD4、CD8与CD45等。

 

为更好的满足广大客户对流式抗体的应用需求,全式金自主研发了多款带有不同荧光标记的直标流式抗体,可应用于MSC鉴定和免疫学分析,能够快速高效地进行细胞表面不同标志物的流式检测。


应用领域-MSC鉴定

 CD73

CD73蛋白分子量约为70 kD,通常由两个相同的亚基通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞表面形成同源二聚体,可将单磷酸腺苷(AMP)水解为腺苷。CD73作为淋巴细胞分化的标志,在一些免疫缺陷病中表达减弱。据研究报道,CD73是一种潜在的生物标志物,其高表达与多种类型肿瘤的不良预后密切相关。

 Anti-Human CD73,FITC (HF101) 

 Anti-Human CD73,PE (HF102)

 Anti-Human CD73,APC (HF104)

该产品通过亲和层析纯化CD73单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得,用于细胞表面CD73抗原的流式检测。


 明显区分阳性和阴性细胞群


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 CD105

CD105又称为内皮糖蛋白(Endoglin),是位于细胞表面的I型跨膜蛋白,由同源二聚体组成,分子量约为90 kD。CD105是TGF-β受体复合物之一,高度结合TGF-β1和β3,但与β2不结合。CD105在血管内皮细胞中高度表达,是肿瘤血管生成的标志性分子。

 Anti-Human CD105,PE (HF112)

 Anti-Human CD105,APC (HF114) 

该产品通过亲和层析纯化CD105单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素PE、APC偶联制得,用于细胞表面CD105抗原的流式检测。


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 CD90

CD90又称为Thy 1,是一种分子量为25-37 kD的糖蛋白,通过糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 锚定在细胞膜表面,属于免疫球蛋白超家族。CD90是微血管内皮细胞活化的标志,与新生血管形成有关,也是鉴别MSC的重要标志之一。CD90与β2和β3整合素结合,参与细胞粘附的调控。

 Anti-Human CD90,APC (HF134)

该产品通过亲和层析纯化人CD90单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素APC偶联制得,用于细胞表面CD90抗原的流式检测。


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 CD45

CD45,也被称为白细胞共同抗原 (LCA) 或蛋白酪氨酸磷酸酶受体C (PTPRC),由一类结构相似,分子量在180-240 kDa之间的单链I型跨膜糖蛋白组成。CD45是一种酪氨酸磷酸酶,通过使包括p56Lck、p59Fyn和其它Src 家族激酶在内的底物去磷酸化,在T和B细胞抗原受体介导的激活中起关键作用。此外,CD45是细胞膜上信号传导的关键分子,在淋巴细胞的发育成熟、功能调节及信号传递中具有重要意义。

 Anti-Human CD45,FITC (HF121)

Anti-Human CD45,PerCP-Cy5.5 (HF125)

该产品通过亲和层析纯化CD45单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素FITC、PerCP-Cy5.5偶联制得,用于细胞表面CD45抗原的流式检测。


  CD45在MSC细胞表面不表达;在PBMC细胞表面强表达,用CD45-FITC、CD45-PerCP-Cy5.5分别标记后,可明显区分阳性和阴性细胞群。


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 多色流式抗体共染

 Human MSC Characterization Kit (HF001)

该产品专门用于人MSC表面标志物的流式检测和鉴定,包含三种用于鉴定人MSC的荧光标记抗体,以及一种用于鉴定非MSC的荧光标记抗体。通过流式检测,MSC表达阳性标志物CD73、CD90和CD105的比例≥ 95%,同时表达阴性标志物CD45的比例≤ 2%。


 产品特点 

 采用多色流式抗体共染,包含CD73+、CD90+、CD105+、CD45-共4种抗体。

 最大限度减少检测所需细胞量。

 特异性强且操作简便,适用于各种来源MSC的鉴定。

 人脐带来源MSC鉴定,其中CD73、CD90和CD105表达比例≥ 95%,CD45表达比例≤ 2%。


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应用领域-免疫学流式分析

 CD3

CD3,是由五条肽链(CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3η、CD3ζ)组成的蛋白复合物,属于免疫球蛋白超家族的一员。CD3分子与T细胞受体(TCR)结合,共同参与T细胞对抗原的识别、信号转导以及T细胞的活化。该CD3单克隆抗体特异性识别CD3/TCR复合物中的CD3ε链,可用于T细胞的激活和扩增。

 Anti-Human CD3,FITC (HF151)

 Anti-Human CD3,PE (HF152)

 Anti-Human CD3,APC (HF154)

该产品通过亲和层析纯化CD3单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得,用于细胞表面CD3抗原的流式检测。


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 CD4

CD4,是一种55 kDa的单链I型跨膜糖蛋白,为T细胞受体(TCR)识别抗原的共受体,与MHCⅡ类分子的非多肽区结合,参与T细胞TCR识别抗原的信号转导。CD4也是HIV的主要受体。在巨噬细胞或NKT细胞中,CD4在TCR/LCK不依赖信号通路中,调控细胞的分化、激活、细胞因子表达和细胞迁移。

 Anti-Human CD4,FITC (HF141) 

Anti-Human CD4,PE (HF142) 

 Anti-Human CD4,APC (HF144) 

该产品通过亲和层析纯化CD4单克隆抗体后,在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得,主要应用于细胞表面CD4抗原的检测。


 明显区分阳性和阴性细胞群


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  不同荧光标记的抗体混合染色后,分离效果较好,特异性强。


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荧光标记抗体产品信息


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